Produse

Fosforilarea proteinelor reglează diverse funcții celulare și joacă un rol cheie în dezvoltarea timpurie a plantelor.Pentru a completa și extinde investigațiile anterioare ale fosforilării proteinelor în răsadurile de Arabidopsis, am folosit o abordare alternativă care combină extracția proteinelor în condiții nedenaturante cu îmbogățirea prin cromatografia de afinitate cu ioni metalici imobilizați (IMAC) a fosfoproteinelor intacte din extractele epuizate în Rubisco, urmată de identificare. folosind electroforeză în gel bidimensională (2-DE) și cromatografie lichidă-spectrometrie de masă în tandem (LC-MS/MS).Digestia tripsină în gel și analiza petelor selectate de gel au identificat 144 de peptide și reziduuri fosforilate, dintre care doar 18 fosfopeptide și 8 fosfoziți au fost găsite în bazele de date ale site-urilor de fosforilare PhosPhAt 4.0 și P3DB Arabidopsis thaliana.Mai mult de jumătate din cele 82 de fosfoproteine ​​identificate au fost implicate în metabolismul carbohidraților, fotosinteză/respirație sau mecanismele de răspuns la stres oxidativ.Îmbogățirea fosfoproteinelor intacte înainte de 2-DE și LC-MS/MS pare să îmbunătățească detectarea reziduurilor de treonină și tirozină fosforilate în comparație cu metodele care utilizează îmbogățirea la nivel de peptidă, sugerând că cele două abordări sunt oarecum complementare în ceea ce privește acoperirea situsului de fosforilare.Comparând rezultatele pentru puieții tineri cu cele obținute anterior pentru frunzele mature de Arabidopsis a identificat cinci proteine ​​care sunt fosforilate diferențial în aceste țesuturi, demonstrând potențialul acestei tehnici de investigare a dinamicii fosforilării proteinelor în timpul dezvoltării plantelor.