Produse

Perspective mecaniciste asupra unei familii de alfa-manozidaze dependente de Ca2+ într-un simbiont intestinal uman.

Bacteriile colonice, exemplificate de Bacteroides thetaiotaomicron, joacă un rol cheie în menținerea sănătății umane prin valorificarea familiilor mari de glicozide hidrolaze (GH) pentru a exploata polizaharidele dietetice și glicanii gazdă ca nutrienți.O astfel de expansiune a familiei GH este exemplificată prin familia de 23 de glicozidaze GH92 codificate de genomul B. thetaiotaomicron.Aici arătăm că acestea sunt alfa-manozidaze care acționează printr-un singur mecanism de deplasare pentru a utiliza N-glicanii gazdă.Structura tridimensională a două manozidaze GH92 definește o familie de proteine ​​cu două domenii în care centrul catalitic este situat la interfața domeniului, oferind asistență acidă (glutamat) și bazică (aspartat) la hidroliză într-un Ca(2+)- mod dependent.Structurile tridimensionale ale GH92 în complex cu inhibitori oferă o perspectivă asupra specificității, mecanismului și itinerariului conformațional al catalizei.Ca(2+) joacă un rol catalitic cheie în a ajuta la distorsionarea manozidei de la starea sa fundamentală (4)C(1) conformației scaunului către starea de tranziție.（Bibliografie: Nat.Chim.Biol.6, 125-32, (2010)

Cromatografia de afinitate frontală a glicoasparaginelor de ovalbumină pe o coloană de concanavalin A-sefaroză.Un studiu cantitativ al specificității de legare a lectinei.

Interacțiunile concanavalinei A (ConA) imobilizate cu Sepharose 4B cu 10 glicoasparagine derivate din ovalbumină au fost investigate cantitativ prin cromatografie de afinitate frontală.În această metodă, o soluție de carbohidrați este aplicată continuu pe o coloană ConA-Sepharose și întârzierea frontului de eluție este măsurată ca parametru al puterii interacțiunii.Se poate determina constanta de disociere (Kd) pentru fiecare zaharidă cu ConA.O analiză a legării p-nitrofenil-alfa,D-manozidei a arătat că proprietățile de legare ale ConA nu se modifică în mod esențial după imobilizarea pe Sepharose 4B.Fiecare dintre glicoasparaginele de ovalbumină a fost marcată cu tritiu prin metoda de metilare reductivă pentru analiză.O comparație a valorilor Kd obținute a arătat că legarea ConA variază considerabil cu diferențe structurale foarte mici ale lanțului glicozilic.Rezultatele sugerează că ConA recunoaște o structură specifică a lanțului glicozilic, Man alfa 1-6(Man alfa 1-3)Man, în care cel puțin o grupare hidroxil la poziția C-3 a manozei legate de C-6 ar trebui să fie liberă.