Produse

Căile moleculare patogene în bolile hepatice cirotice, cum ar fi virusul hepatitei C (VHC), hepatita autoimună (AIH) și ciroza biliară primară (CBP) sunt slab caracterizate.Genele exprimate diferențial sunt adesea importante în patogenia bolii.Hibridizarea subtractivă de suprimare (SSH) este o abordare la nivel de genom care îmbogățește transcriptele ARNm exprimate diferențial.Ne-am propus să facem observații noi ale expresiei diferențiale a genelor în ciroză folosind SSH combinat cu reacția cantitativă în lanț a polimerazei cu revers transcriptază (RT-PCR) în timp real.Transcriptoamele hepatice în ciroza HCV, ciroza AIH, PBC și țesutul hepatic nebolnav au fost examinate prin SSH.Clonele de ADN complementar (ADNc) rezultate au fost recerrate pentru expresie diferențială prin hibridizare dot-blot și apoi secvențiate.Expresia genei selectate a fost cuantificată prin RT-PCR în timp real.După SSH, 694 de clone au fost rescreenate pentru expresia diferențială a genelor, dintre care 145 au fost secvențiate și s-au dovedit că derivă din 89 de gene diferite.Șapte clone au fost omoloage numai cu secvențe de etichetă de secvență exprimată (EST) care codifică gene care nu au nicio funcție cunoscută.Expresia reglată în sus a patru gene a fost confirmată prin RT-PCR în timp real: membru 3 al superfamiliei transmembranare 4 (tetraspanin CO-029) în toate formele de ciroză, proteină care interacționează cu arici (HIP) în ciroza AIH și chitinaza 3-like-1 (HC gp-39 sau ykl-40) și repetarea acidului arginină-glutamic (RERE) în ciroza VHC.Polimorfismele genei RERE și variantele de îmbinare au fost observate în toate țesuturile examinate.Reglarea ascendentă a tetraspaninei CO-029 a fost localizată în principal în celulele ductului biliar.În concluzie, noi observații ale expresiei genice diferențiale în ciroza umană au fost făcute folosind SSH ca instrument principal de descoperire.În special, sunt justificate studii suplimentare ale genei RERE și ale produselor sale în bolile hepatice asociate cu VHC.