Produse

Pentru a cuantifica în mod specific mai mulți metaboliți ai 5-fluorouracil (5-FU) și două nucleotide endogene monofosfat, am dezvoltat o metodă originală bazată pe o cromatografie lichidă-spectrometrie de masă în tandem (LC-MS/MS).Acest test a permis determinarea: (i) producției intracelulare de 5-fluoro-2′-deoxiuridin-5′-monofosfat (5-FdUMP) din 5-FU sau 5-fluoro-2′-deoxiuridină (5-FdUrd) , (ii) impactul concentrației de 5-FdUMP asupra raportului intracelular 2′-deoxiuridin-5′-monofosfat (dUMP)/timidin-5′-monofosfat (TMP) și (iii) gradul de secreție a 5-FdUMP și 5-FU din celule umane cultivate prin transportori ABC.În condițiile noastre experimentale, celulele au fost incubate cu 5-FU sau 5-FUrd.Apoi, proteinele celulare au fost precipitate de metanol.Această procedură a oferit o recuperare ridicată de extracție.În plus, pentru a măsura secreția de 5-FU și 5-FdUMP din celule, am efectuat cuantificarea acestor molecule în mediu de cultură.Mediile au fost fie injectate direct (5-FU), fie sub formă de extracție în fază solidă folosind cartuşul de extracție Oasis Wax (5-FdUMP).Separarea analiților a fost efectuată pe o coloană dC18 Atlantis 3,5 μm, (100 mm × 2,1 mm id) în mod izocratic folosind tampon de formiat de amoniu/metanol/apă (5/5/90, v/v) ca fază mobilă.Timpul de rulare nu a depășit 6,2 min.Analiții au fost ionizați într-o interfață de electrospray în modul ion negativ.Am validat metoda într-un interval de 2,5–150 ng mL -1 în funcție de compuși.Variabilitatea intra și inter-test a fost mai mică de 10% pe parcursul a șapte zile.Toți compușii au fost stabili în celule sau în mediu de cultură atunci când probele au fost păstrate la -20 ° C timp de cel puțin două săptămâni și după trei cicluri de îngheț-dezgheț.Nu a fost observat niciun efect de matrice în ambele medii.