Produse

Topologia membranei a domeniului canalului colicinei E1 a fost studiată prin transfer de energie prin rezonanță fluorescentă (FRET).FRET a implicat un aminoacid fluorescent codificat genetic (cumarină) ca donor și un reziduu de cisteină marcat selectiv legat cu DABMI (4-(dimetilamino)fenilazofenil-4'-maleimidă) ca acceptor FRET.Reziduul cumarină fluorescent a fost încorporat în proteină printr-o pereche ortogonală de ARNt/aminoacil-ARNt sintetază care a permis încorporarea selectivă în orice situs din domeniul canalului de colicină.Fiecare variantă a găzduit o mutație stop (TAG) pentru încorporarea cumarinei și o mutație a cisteinei (TGT) pentru atașarea DABMI.Au fost determinate șase distanțe interhelical în elice 1-6 utilizând analiza FRET atât pentru starea solubilă, cât și pentru cea legată de membrană.Datele FRET au arătat modificări mari ale distanțelor interhelical între elice 3-6 la asocierea membranei, oferind o nouă perspectivă asupra structurii legate de membrană a domeniului canalului.În general, eficiența interhelical cumarină-DABMI FRET a scăzut la legarea membranei, bazându-se pe modelul umbrelă pentru canalul de colicină.Un model tentativ pentru starea închisă a domeniului canalului a fost dezvoltat pe baza datelor FRET curente și publicate anterior.Modelul sugerează aranjarea circulară a elicelor 1-7 în sensul acelor de ceasornic din partea extracelulară și asocierea interfață a membranei a elicelor 1, 6, 7 și 10 în jurul acului de păr transmembranar central format din elicele 8 și 9.