Produse

Monogalactopiranozide ale fluoresceinei și esterului metilic al fluoresceinei: sinteza, hidroliza enzimatică prin β-galactozidază biotinilată și determinarea coeficientului de difuzie translațională

Monoglicozidele fluoresceinei (d-galactopiranozida (FMG) și d-glucopiranozida) și esterul lor metilic (MFMG) au fost preparate din acetobromoglucoză/galactoză și ester metilic al fluoresceinei cu randamente bune.Au fost efectuate experimente de hidroliză enzimatică (folosind β-galactozidază biotinilată) a derivaților galacto și s-au calculat parametrii cinetici.O creștere de 15-20 de ori a intensității fluorescenței a fost observată în timpul hidrolizei.O creștere liniară a fluorescenței a fost observată la timp scurt și concentrație scăzută de substrat, făcând acești compuși sonde utile și sensibile pentru galactozidaze.Mărimea valorii constantei Michaelis-Menten (Km) pentru MFMG este mai mare decât cea a FMG sugerând o posibilă schimbare conformațională a substratului fluorogenic.Valoarea Km pentru β-Gal biotinilat cu FMG este mai mică decât cea pentru enzima nativă.Această observație indică o afinitate mai mare pentru substrat a enzimei biotinilate în comparație cu enzima nativă.Au fost măsurați coeficienții de difuzie translațională, atât pentru substraturi fluorogene, cât și pentru ambele produse, utilizând spectroscopie de corelație a fluorescenței.Coeficienții de difuzie translațională pentru substraturile fluorogene și produșii de hidroliză enzimatică au fost măsurați a fi similari, în intervalul 3,5–4,5 × 10−10 m2 s−1.Astfel, o îmbunătățire sau întârziere a cineticii enzimatice din cauza diferenței în mobilitatea translațională a substratului și a produsului nu este atât de evidentă.