Produse

Proteina ORF45 a herpesvirusului asociat sarcomului Kaposi (KSHV) este o proteină de tegument imediat precoce specifică gamaherpesvirusului.Studiile noastre anterioare au dezvăluit rolurile sale cruciale atât în ​​stadiile incipiente, cât și în cele târzii ale infecției cu KSHV.În acest studiu, am analizat interactomul ORF45 folosind un panou de anticorpi monoclonali.În plus față de proteinele kinazei reglate extracelulare (ERK) și p90 ribozomal S6 kinazei (RSK) identificate anterior, am găsit câteva alte proteine ​​copurificate, inclusiv cele proeminente de ~ 38 kDa și ~ 130 kDa.Spectrometria de masă a arătat că proteina de 38 kDa este ORF33 virală și proteina de 130 kDa este USP7 celulară (proteaza 7 specifică ubiquitinei).Am mapat domeniul de legare a ORF33 la 19 aminoacizi carboxil-terminali extrem de conservați (aa) ai ORF45 și domeniul de legare la USP7 la motivul consens raportat în regiunea centrală a ORF45.Folosind colorarea prin imunofluorescență, am observat colocalizarea ORF45 cu ORF33 sau USP7 atât în ​​condiții de transfectare, cât și în celulele infectate cu KSHV.Mai mult, am observat relocalizarea dependentă de ORF45 a unei porțiuni de ORF33/USP7 de la nucleu la citoplasmă.Am descoperit că ORF45 a provocat o creștere a acumulării proteinei ORF33, care a fost eliminată dacă domeniul de legare a ORF33 sau USP7 din ORF45 a fost șters.În plus, ștergerea capătului carboxil conservat al ORF45 din genomul KSHV a redus drastic nivelul proteinei ORF33 în celulele infectate cu KSHV și a abolit producția de virioni descendenți.Colectiv, rezultatele noastre nu numai că dezvăluie noi componente ale interactomului ORF45, dar demonstrează, de asemenea, că interacțiunile dintre aceste proteine ​​sunt cruciale pentru replicarea litică KSHV. Herpesvirusul asociat sarcomului Kaposi (KSHV) este agentul cauzal al mai multor cancere umane.KSHV ORF45 este o proteină multifuncțională care este necesară pentru replicarea litică a KSHV, dar mecanismele exacte prin care ORF45 își îndeplinește funcțiile critice sunt neclare.Studiile noastre anterioare au arătat că toată proteina ORF45 din celule există în complexe cu greutate moleculară mare.Prin urmare, am căutat să caracterizăm interactomul ORF45 pentru a oferi perspective asupra rolurilor sale în timpul replicării litice.Folosind un panou de anticorpi monoclonali, am cercetat interactomul ORF45 în celulele infectate cu KSHV.Am identificat doi noi parteneri de legare ai ORF45: proteina virală ORF33 și proteaza 7 specifică ubiquitinei celulare (USP7).Demonstrăm în continuare că interacțiunea dintre ORF45 și ORF33 este crucială pentru producerea eficientă a particulelor virale KSHV, sugerând că interferența vizată cu această interacțiune poate reprezenta o strategie nouă pentru a inhiba replicarea litică KSHV.