În jurul nostru sunt mulți eroi necântați, care par a fi obișnuiți, dar de fapt ei contribuie în tăcere foarte mult la noi.Proteinaza K este „eroul necunoscut” în industria de diagnosticare moleculară, deși, în comparație cu „mare și puternic” din industrie, proteinaza K este atât de discretă încât am trecut mult cu vederea importanța sa.Odată cu izbucnirea noii epidemii de coroană, cererea de proteinază K a crescut, iar oferta în țară și în străinătate este cu mult în urma consumului și toată lumea și-a dat seama brusc că proteinaza K este atât de importantă.
Care este utilizarea proteinazei K
Proteinaza K este o serin protează cu activitate enzimatică proteolitică și poate menține activitatea într-o gamă largă de medii (pH (4-12,5), tampon cu conținut ridicat de sare, temperatură ridicată de 70°C etc.).În plus, activitatea proteinazei K nu este inhibată de SDS, uree, EDTA, clorhidrat de guanidină, izotiocianat de guanidină etc., iar o anumită cantitate de detergent poate spori, de asemenea, activitatea proteinazei K. În tratamentul medical (dezinfecție virală și microbiană) ), alimente (frăcirea cărnii), piele (înmuierea părului), vinificație (clarificarea alcoolului), prepararea aminoacizilor (pene degradate), extracția acidului nucleic, hibridizarea in situ etc., proteinaza K Există aplicații.Aplicația cea mai frecvent utilizată este extracția acidului nucleic.
Proteinaza K poate enzimoliza tot felul de proteine din probă, inclusiv acele histone care sunt strâns legate de acizii nucleici, astfel încât acizii nucleici să poată fi eliberați din probă și eliberați în extract, facilitând următoarea etapă de extracție și purificare.În detectarea acidului nucleic viral, proteinaza K este una dintre componentele importante în soluția de prelevare a virusului.Proteinaza K poate sparge și inactiva proteina de înveliș a virusului, care este mai sigură în timpul etapei de transport și detecție;în plus, proteinaza K poate degrada și RNaza previne degradarea ARN viral și facilitează detectarea acidului nucleic.
Faima peste noapte a proteinazei K
Fie în domeniul cercetării științifice, fie în domeniul IVD, extracția acidului nucleic este cel mai de bază experiment, așa că proteinaza K a fost întotdeauna o existență foarte importantă.Cu toate acestea, în trecut, proteinaza K era mult mai puțin cunoscută decât rolul său.O mare parte din aceasta s-a datorat faptului că relația dintre cerere și ofertă a proteinazei K a fost foarte stabilă.Puțini oameni ar crede că furnizarea de proteinază K ar fi o problemă.
Odată cu izbucnirea noii epidemii de coroană, cererea de testare a acidului nucleic a crescut.La sfârșitul lunii iunie 2020, China a finalizat aproape 90 de milioane de noi teste de coroană, iar acest număr este și mai alarmant la scară globală.În experimentele de extracție cu acid nucleic, concentrația de lucru a proteinazei K este de aproximativ 50-200 μg/mL.În general, este nevoie de aproximativ 100 μg de proteinază K pentru a extrage o probă de acid nucleic.În utilizarea efectivă, pentru a crește eficiența extracției acidului nucleic, adesea Proteinaza K va fi utilizată într-o cantitate crescută.Detectarea acidului nucleic a noului coronavirus a adus o cantitate mare de cerere de proteinază K.Echilibrul original al cererii și ofertei de proteinază K a fost rupt rapid, iar proteinaza K a devenit un material important de prevenire a epidemiei peste noapte.
Dificultăți în producerea proteinazei K
Deși odată cu dezvoltarea epidemiei, valoarea importantă a proteinazei K a fost apreciată de oameni, este jenant că, din cauza lipsei excesive a proteinazei K, puține companii autohtone au fost implicate în producerea proteinazei K. Când oamenii doresc să stabilească producția de proteinază K În timpul procesului de producție, s-a descoperit că proteinaza K este o proteină extrem de specială.Este extrem de dificil să extinzi capacitatea de producție a proteinazei K într-o perioadă scurtă de timp.
Producția pe scară largă de proteinază K se confruntă cu următoarele dificultăți
1. Expresie scăzută
Proteinaza K poate degrada nespecific majoritatea proteinelor și poate provoca toxicitate gravă asupra celulei gazdă de expresie.Prin urmare, nivelul de expresie al proteinazei K este în general foarte scăzut.Screening-ul sistemelor de expresie și tulpinilor care exprimă în mare măsură proteinaza K necesită, în general, un ciclu mai lung.
2. Reziduuri de pigmenți și acizi nucleici
Fermentația la scară largă introduce o cantitate mare de pigment și reziduuri de acid nucleic gazdă.Este dificil să îndepărtați aceste impurități printr-un proces simplu de purificare, iar purificarea complexă crește costul și reduce rata de recuperare.
3. Instabilitate
Proteinaza K nu este suficient de stabilă, se poate enzimoliza singură și este dificil să o păstrați stabil la 37°C pentru o perioadă lungă de timp fără un agent de protecție.
4. Usor de precipitat
Când se prepară pulberea liofilizată de proteinază K, pentru a se asigura că conținutul solid de proteinază K din pulberea liofilizată este mare, este necesar să se adauge un agent de protecție liofilizat la o concentrație mare, dar când concentrația de proteinază K ajunge la 20mg/mL și peste, este ușor. Agregarea formează un precipitat, care aduce mari dificultăți la liofilizarea proteinazei K cu un conținut ridicat de solide.
5. Investiție mare
Proteinaza K are activitate protează puternică și poate hidroliza alte proteaze în laborator.Prin urmare, proteinaza K necesită zone de producție specializate, echipamente și personal pentru cercetare și dezvoltare și producție.
Soluția de proteinază K XD BIOCHEM
XD BIOCHEM has a mature protein expression and purification platform, and has rich experience in the expression and purification of recombinant proteins and optimization of production processes. Through the rapid formation of a research and development team, the large-scale production process of proteinase K has been overcome. The monthly output of freeze-dried powder is more than 30 KG. The product has stable performance, high enzyme specific activity, and no host cytochrome and nucleic acid residues. Welcome to contact XD BIOCHEM Obtain a trial package (E-mail: sales@xdbiochem.com Tel: +86 513 81163739).
Soluțiile tehnice XD BIOCHEM includ
Folosind integrarea cu mai multe copii de plasmide, sunt selectate tulpini cu expresie ridicată cu un nivel de expresie de 8g/L, ceea ce depășește problema nivelului scăzut de expresie al proteinazei K;
Prin stabilirea unui proces de purificare în mai multe etape, citocromul gazdă și reziduurile de acid nucleic ale proteinazei K au fost îndepărtate cu succes sub valoarea standard;
Prin screening-ul cu randament mare a formulărilor de tampon de protecție, a fost selectat un tampon care poate stoca stabil proteinaza K la 37°C;
Tampoanele de screening depășește problema conform căreia proteinaza K este ușor de agregat și precipitat la concentrații mari și pune bazele pentru uscare prin congelare a proteinazei K cu conținut ridicat de solide.
Probă de proteinază K XD BIOCHEM
Testul de stabilitate a proteinazei K XD BIOCHEM: nu va exista nicio modificare semnificativă a activității după 80 de zile la temperatura camerei
Testul de stabilitate a proteinazei K XD BIOCHEM: nu va exista nicio modificare semnificativă a activității după 80 de zile la temperatura camerei
Comparația efectului de extracție a acidului nucleic al proteinazei K XD BIOCHEM și a produselor concurente.În procesul de extracție a acidului nucleic se utilizează XD BIOCHEM și respectiv proteinaza competitivă K.Eficiența de extracție a proteinazei K XD BIOCHEM este mai mare, iar valoarea Ct a genei țintă este mai mică.
Ora postării: 31-dec-2021