Produse

LecA (PA-IL) este o lectină și adezină citotoxică produse de Pseudomonas aeruginosa care leagă galactozidele hidrofobe cu specificitate și afinitate ridicate.Folosind o fuziune de traducere lecA-egfp și o analiză imunoblot a matricei extracelulare biofilm, arătăm că lecA este exprimată în celulele crescute cu biofilm.În testele biofilmului statice atât pe polistiren, cât și pe oțel inoxidabil, adâncimea biofilmului și acoperirea suprafeței au fost reduse prin mutația lecA și îmbunătățite în tulpina PAO-P47 care supraproducă LecA.Acoperirea suprafeței biofilmului de către tulpina părinte, PAO-P47, dar nu mutantul lecA pe cupoanele de oțel, a fost, de asemenea, inhibată de creșterea în prezența fie a izopropil-beta-D-tiogalactozidei (IPTG) fie a p-nitrofenil-alfa-D-galactozidei ( NPG).Mai mult, biofilmele mature de tip sălbatic formate în absența acestor galactozide hidrofobe ar putea fi dispersate prin adăugarea de IPTG.Spre deosebire de aceasta, adăugarea de p-nitrofenil-alfa-L-fucoză (NPF) care are o afinitate mare pentru lectina P. aeruginosa LecB (PA-IIL) nu a avut niciun efect asupra formării sau dispersării biofilmului.Creșterea planctonă a P. aeruginosa PAO1 nu a fost afectată de prezența IPTG, NPG sau NPF și nici tulpina nu a fost capabilă să utilizeze aceste zaharuri ca surse de carbon, ceea ce sugerează că efectele observate asupra formării biofilmului s-au datorat inhibării competitive a ligandului LecA. legare.Rezultate similare au fost obținute și pentru biofilmele crescute în condiții de curgere dinamică pe cupoane de oțel, sugerând că LecA contribuie la arhitectura biofilmului P. aeruginosa în diferite condiții de mediu.

O alfa-L-fucozidază (EC 3.2.1.51) capabilă să elibereze reziduul de t-fucozil din lanțul lateral al oligozaharidelor de xiloglucan a fost detectată în frunzele plantelor Arabidopsis.Mai mult, o alfa-L-fucozidază cu specificitate similară de substrat a fost purificată din frunze de varză (Brassica oleracea) pentru a forma o singură bandă pe SDS-PAGE.Două secvențe de peptide au fost obținute din această bandă de proteine ​​și au fost utilizate pentru a identifica o genă Arabidopsis care codifică o alfa-fucozidază pe care ne propunem să o numim AtFXG1.În plus, a fost găsită și o genă Arabidopsis cu omologie cu alfa-L-fucozidaze cunoscute și am propus să o denumim ca AtFUC1.AtFXG1 și ATFUC1 au fost exprimate heterolog în celulele Pichia pastoris și activitățile alfa-L-fucozidazei au fost secretate în mediul de cultură.Alfa-L-fucozidaza codificată de AtFXG1 a fost activă împotriva oligozaharidelor din xiloglucan XXFG, precum și împotriva 2'-fucozil-lactitolului, dar nu împotriva p-nitrofenil-alfa-L-fucopiranozide.Cu toate acestea, AtFUC1 exprimat heterolog a fost activ numai împotriva 2’-fucosil-lactitolului.Astfel, primul trebuie să fie legat de metabolismul xiloglucanului.