Produse

Diferențierea fibroblastelor orbitale în adipocite mature și acumularea ulterioară de țesut adipos a fost demonstrată în progresia orbitopatiei Graves (GO).Autofagia este implicată în adipogeneză, dar se știe puțin despre rolul autofagiei în inițierea și progresia GO.Scopul acestui studiu este de a investiga rolul autofagiei în patogeneza GO. Au fost analizate explante de țesut adipos/conjunctiv orbital de la pacienți cu OG și de la subiecți normali, precum și fibroblaste orbitale izolate.Adipogeneza a fost indusă utilizând mediu de diferențiere cu sau fără peroxid de hidrogen, iar autofagia a fost manipulată utilizând bafilomicina A1 și ARN ac de păr scurt (shRNA) vizat de Atg5.Autofagozomii au fost identificați prin microscopie electronică.Expresia genelor legate de autofagie și factorii de transcripție legați de adipogeneză au fost analizate prin reacția în lanț a polimerazei-transcripție inversă în timp real și/sau analiză Western blot.Acumularea picăturilor de lipide a fost examinată prin colorare Oil Red O. Vacuolele autofagice au fost mai abundente în celulele GO decât în ​​celulele non-GO (p<0,05).Expresia genelor legate de autofagie a fost semnificativ mai mare în țesuturile și celulele GO decât în ​​omologii lor non-GO, respectiv.Interleukina-1β a crescut proteina LC3-II, p62 și Atg7 în celulele GO.Acumularea de autofagozomi a fost demonstrată în ziua 4 de adipogeneză și a scăzut până în ziua 10, împreună cu formarea picăturilor de lipide.Expresia proteinelor LC3 și p62 a crescut în 48 de ore de la diferențiere și a scăzut treptat din ziua 4 până în ziua 10. Tratamentul cu bafilomicina A1 și distrugerea Atg5 de către shRNA au inhibat acumularea de picături de lipide și a suprimat expresia markerilor adipogeni. Autofagia a fost crescută în țesutul și celulele GO, comparativ cu țesut și celule non-GO, sugerând că autofagia joacă un rol în patogeneza GO.Manipularea autofagiei poate fi o țintă terapeutică pentru GO.